¡Amigos de Steemit! Bienvenidos una vez más a este blog.
Comienzo mencionando y agradeciendo a los amigos de @Steemstem @Stem-espanol, @Utopian-io @Entropia, @Proconocimiento, @la-colmena y @Curie que han sido de gran apoyo en las publicaciones científicas.
En esta oportunidad seguimos hablando sobre los materiales, técnicas y procedimientos previos usados en MICOLOGÍA para llegar a la identificación y diagnóstico de estos microorganismos donde el bioanalista tiene un rol fundamental. Por esta razón en esta publicación podrán apreciar de manera detallada, paso a paso sobre la Técnica de Microcultivo por el Método de Ridell.
Comencemos...
¿Qué es un microcultivo?
Es una técnica empleada en el laboratorio de micología, para favorecer la esporulación de los hongo filamentoso. Consiste en colocar una pequeña porción de un medio de cultivo sobre una lámina portaobjetos asegurando que el hongo filamentoso esté en condiciones extremas, para facilitar así la esporulación o reproducción y lograr evidenciar todas las estructuras morfológicas que nos permiten realizar la identificación del agente patógeno en estudio.
¿Cómo se elabora un microcultivo por el Método de Ridell o del cuadrito?
Se corta un cuadrito de agar entre 1-1,5cm de agar y se coloca sobre una lámina portaobjeto, se toma un repique (un trozo pequeño) del hongo que se quiere identificar y se siembra en los cuatro costados del cuadrito y por último se le coloca una laminilla en la parte superior como especie de una tapa.
Es necesario tener en cuenta a modo general la estructura de los hongos:
Básicamente están formado un micelio aéreo y un micelio vegetativo, que al verlos al microscopio se observan hifas y conidias. Cuando el microorganismo es sembrado en medios de cultivo en placa o en tubo, muchas veces su micelio reproductivo no produce las conidias, y de esta manera se van a observar solo hifas, que tienden a ser muy parecidas entre los diversos géneros y especies de muchos hongos filamentosos.
Cuando se siembra al hongo en un microcultivo se induce y favorece la producción de conidias, estructuras morfológicas claves para poder dar nombre y apellido al hongo patógeno, porque en cada microorganismo es diferente esta esporulación aunque posean características similares entre géneros y especies.
Para comprender mejor, les muestro un ejemplo
Evidenciamos acá dos fotos de un mismo microorganismo:
En la Imagen A vemos solo las hifas (estructuras tubulares) que puede ser de cualquier hongo, ya que muchos presentan esta misma estructura.
Nota: a esto se le suma la clínica del paciente y el crecimiento macroscópico del cultivo para que todos los criterios concuerden con lo que se está evidenciando.
Por otro lado en la Imagen B vemos las hifas y además gran cantidad de conidias luego de realizar el Microcultivo, con esta imagen, vemos la disposición de dichas conidias (microconidias) a lo largo de las hifas, esa estructura que está en el indicador muestra un arreglo en forma de “FLOR DE MARGARITA” que es característica de Sporothrix schenckii, estructura que no se evidencia en otros hongos patógenos.
Por otro lado Acremonium sp tiende a formar este tipo de Flor de Margarita pero se diferencian en que sus conidias son más grandes, alargadas y produce otras estructuras que permiten distinguirlo del que se muestra en la Imagen B.
Materiales e instrumentos necesarios para realizar un microcultivo
- Placa de Petri
- Lámina portaobjeto
- Soporte de vidrio o metal en forma de V
- Agua destilada estéril
- Laminillas
- Pinza
- Asa micológica o estilete.
- Mechero
- Bisturi
Procedimiento para montar el microcultivo
1.- Debemos encender el mechero para esterilizar los instrumentos que se van a utilizar.
2.- Se identifica la placa de Petri con el número de caso, el nombre del paciente o muestra y la fecha.
2.- Se toma una placa de agar LACTRIMEL (recomendado, porque es un medio casero que favorece la esporulación) y con un bisturí estéril, se hacen cortes de los cuadritos de aproximadamente 1cm o 1,5cm.
3.- Con la placa de Petri destinada al microcultivo se coloca la lámina portaobjeto sobre el soporte de vidrio o metal.
Se debe tener en cuenta que la placa de Petri debe abrirse lo menos posible, y que la lámina portaobjeto debe montarse sobre el soporte con la pinza previamente flameada en el mechero para seguir con la esterilidad del proceso.
4.- Tomar con el bistuti previamente flameado dos trozos de agar Lactrimel y colocarlos en la lámina portaobjeto con una distancia considerable que permita el crecimiento del hongo en ambos cuadros de manera independiente.
Nota: recordar mantener la placa de Petri cerrada y cerca del mechero SIEMPRE para evitar que las conidias de los hongos ambientales que están libres en el aire no ingresen y contaminen el microcultivo.
5.- Tomar la colonia que se quiere identificar y con el estilete se toman pequeños repiques y se siembran en los 4 costados (laterales) de ambos cuadros del agar.
6.- Luego con la pinza, se toma una laminilla cubreobjeto, se flamea en el mechero y se coloca sobre el cuadrito de agar, como una especie de techo o sombrero.
7.- Por último le agregamos el agua destilada estéril para mantener un ambiente húmedo dentro de la placa que favorece al proceso de reproducción.
Se procede a colocar el microcultivo en un lugar seguro. Una vez que se hace esto, la colonia fúngica va a crecer entre la lámina portaobjetos y la laminilla, tardando aproximadamente unos 4-7 días en crecer, haciendo que sus estructuras se fijen y se estampen tanto en la lámina como en la laminilla, luego se desmonta y se examina en el microscopio.
HASTA AQUÍ ESTE NUEVO APORTE.
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TODAS LAS FOTOS PRESENTADAS SON PROPIAS.
REESTIMEA
Fuentes:
- Guía de la cátedra de Micología, Bioanálisis-UVC.
- http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microambiental/wp-content/uploads/2016/08/TP-8-Micolog%C3%ADa.pdf
- https://www.ugr.es/~pomif/pom-euc/micol/mico-micro/mam-i-3-metodos.htm
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